人胚胎膀胱组织来源细胞；CCC-HB-2细胞冻存操作

人胚胎膀胱组织来源细胞；CCC-HB-2细胞冻存操作:

冻存液配方: 无血清冻存液,液氮储存

细胞密度 :待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例

冻存方法: a、收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,加1 mL血清重悬细胞,进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5x106~1x107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

注意事项 :冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性,若有异常,及时调整实验方案

收到后处理:

细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满培养液并封好瓶口是细胞运输的办法。收到细胞回到自己的实验室后,先打开外包装,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内,严格无菌操作,培养箱静置2-4小时。镜下观察:未超过80%汇合度时,可将瓶装的培养液收集至离心管中,加入6ml培养基,放入37℃、5%CO2孵箱培养;超过80%汇合度时,根据情况传代或者冻存,具体操作见细胞培养步骤。(注意发货的是密封培养瓶的话,放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松,传代后建议一瓶用原瓶里面的培养基,另外一瓶用自己配的培养基)